總蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品概述product description

總蛋白提取試劑盒提供全套試劑,適用于從各種原代或傳代培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞和各種動(dòng)物實(shí)體組織，如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、 肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等動(dòng)物組織樣品中提取總蛋白。配合其他試劑時(shí)，也可以用于植物、細(xì)菌、真菌、酵母等樣品的總蛋白提

取。本試劑盒含有的獨(dú)特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份,包括細(xì)胞質(zhì)膜、核膜和各種細(xì)胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解,為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、 轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯

實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

保存溫度

2-8°C

注意事項(xiàng)

1.蛋白酶抑制劑末開蓋使用前也可以2-8°C儲(chǔ)存。開蓋使用后-20°C儲(chǔ)存。

2.蛋白酶抑制劑在2-8°C低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37°C短時(shí)間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部

開蓋。

3.試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完!

有效期

年

檢測(cè)方法

WB,IP等

適用樣本

動(dòng)物細(xì)胞/組織

產(chǎn)品特點(diǎn)

2.提取過程簡(jiǎn)單方便，將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。

3.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4.紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

5.總蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白,又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。

6.蛋白酶抑制劑抑制”了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑AEBSF、

Aprotinin、Leupeptin、 PepstatinA、 Bestatin、 E-64, 每-種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。 該混合

物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨

酰-氨基肽酶等。

產(chǎn)品應(yīng)用

WB,IP等

儀器準(zhǔn)備

1.離心機(jī)

2.振蕩器

3.勻漿機(jī)/勻漿器

4.渦旋混勻器

5.移液器

6.冰箱

7.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液

2蛋白定量試劑盒

耗材準(zhǔn)備

1.離心管

2.吸頭

3.一次性手套

使用注意事項(xiàng)

0旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時(shí)液體灑落。

蛋白酶抑制劑在2-8°C時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37*C短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開

實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷;所有器具須放-20°C冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。

0蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用,溶解后正常使用。

如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

0下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測(cè)，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑,注意提取過程

保持低溫操作,縮短離心時(shí)間。

離心機(jī)轉(zhuǎn)速有相對(duì)離心力(RCF, xg) 和每分鐘轉(zhuǎn)速(RPM, r/min) 兩種表示方式,有些離心機(jī)設(shè)置有RPM和xg顯示

切換，但部分離心機(jī)沒有自動(dòng)切換功能。需要用下面的公式進(jìn)行換算: g=rx1.118x10-5xrpm2 (r 為有效離心半徑，

即從離心機(jī)軸心到離心收集管底部中心位置的長(zhǎng)度，單位為厘米) 例如:轉(zhuǎn)速為3000rpm,有效離心半徑為10 cm,則相

對(duì)離心力(RCF, xg)為=10x1.118x10-5x 30002=1006.2 (xg) 。

使用方法

懸浮細(xì)胞蛋白提取:

1.提取液準(zhǔn)備:

每500 u冷的總蛋白提取液中加入2 u蛋白酶抑制劑混合物和2 μ山l磷酸酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2.取5x106個(gè)細(xì)胞，在4°C, 2500xg條件下離心5分鐘,小心吸取培養(yǎng)基,盡可能吸干,收集細(xì)胞。

3.用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次,每次洗滌后盡可能吸干上清。

4.每5x106 -1x107個(gè)細(xì)胞(大約50 mg細(xì)胞/50 μl細(xì)胞沉淀體積)中加入500 u嶺的總蛋白提取液，吹打混勻后，在

4°C條件 下振蕩20-30分鐘，至細(xì)胞充分裂解,無明顯細(xì)胞沉淀。

5.在4°C, 12000xg條件下離心15分鐘。

6.將上清吸入另-預(yù)冷的干凈離心管，即可得到總蛋白。

7.將上述蛋白提取物定量后分裝于-80°C冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。