MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒

產(chǎn)品概述 product description

TM BBcellProbeTM MTT法細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測?；罴?xì)胞的線粒體中存在與NADP相關(guān)的脫氫酶，可將黃色的MTT還原生成結(jié)晶狀的藍(lán)紫色的Formazan，死細(xì)胞無此酶，MTT不被還原。在特定溶劑存在的情況下，F(xiàn)ormazan可以被完全溶解。然后通過酶標(biāo)儀可以測定460-630nm波長附近的吸光度。細(xì)胞增殖越多越快，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，則吸光度越低。 本試劑盒靈敏度高，線性范圍寬，使用方便。 貝博TM BBcellProbeTM 可以提供細(xì)胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、細(xì)胞代謝、氧化應(yīng)激、細(xì)胞膜流動性、膜通透性轉(zhuǎn)換孔、細(xì)胞耗氧率、細(xì)胞內(nèi)pH、細(xì)胞粘附、細(xì)胞自噬等數(shù)百種檢測試劑盒產(chǎn)品。 貝博TM BBcellProbeTM 可以為您提供各種顏色的BBcellProbeTM M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、溶酶體、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、骨架、微管等細(xì)胞、細(xì)胞亞結(jié)構(gòu)熒光染色試劑盒產(chǎn)品，以及鈣離子、鈉離子、氬離子等各種熒光染色試劑盒產(chǎn)品。

保存溫度

2-8℃避光

注意事項

長期不用分裝后-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

有效期

一年

檢測方法

酶標(biāo)儀

適用樣本

動物細(xì)胞

產(chǎn)品應(yīng)用

酶標(biāo)儀

儀器準(zhǔn)備

1.帶有450nm濾光片的酶標(biāo)儀 2. CO2培養(yǎng)箱

試劑準(zhǔn)備

1.PBS 2.純水

耗材準(zhǔn)備

1.移液器及吸頭 2.96孔培養(yǎng)板

使用注意事項

1.需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融，否則將會增加空白吸收，從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
2.還原的MTT在460-630均有較好的吸收，如果你的酶標(biāo)儀是濾光片，可以選470 nm左右或630 nm左右的濾光片，如果酶標(biāo)儀有單波長，你可以在檢測前掃描一下吸收譜，選用最大吸收波長檢測，最大波長，在550nm附近，必要時加一個參比波長以扣除非特異性吸收。

使用方法

貼壁細(xì)胞：
1. 收集對數(shù)期細(xì)胞，每孔加入100ul細(xì)胞懸液,使待測細(xì)胞調(diào)密度約2000-10000孔。
2. 5%CO2，37℃孵育，至細(xì)胞單層鋪滿孔底（96孔平底板）,加入濃度梯度的藥物,原則上，細(xì)胞貼壁后即可加藥，也可兩小時，或半天時間后加藥，一般5-7個梯度,每孔100ul,設(shè)3-5個復(fù)孔。
3. 5%CO2，37℃孵育16-48小時，倒置顯微鏡下觀察。
4. 每孔加入10ulMTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4h。若藥物與MTT能夠反應(yīng)，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS沖2-3遍后，再加入含MTT的培養(yǎng)液。
5. 終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。
6. 每孔加入150ul溶解液，置搖床上低速振蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶標(biāo)儀490nm或550nm或570nm處測量各孔的吸光值。
7. 同時設(shè)置調(diào)零孔（培養(yǎng)基、MTT、溶解液），對照孔（細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、溶解液） 懸浮細(xì)胞：
1. 收集對數(shù)期細(xì)胞，調(diào)節(jié)細(xì)胞懸液濃度1×106/ml，按次序?qū)⒀a足的無血清培養(yǎng)基40ul、需檢測藥物10ul、細(xì)胞懸液50ul（即5×104細(xì)胞/孔），共100ul加入到96孔板（邊緣孔用無菌水或PBS填充）。每板設(shè)對照（加100?l培養(yǎng)基）。
2. 置37℃，5%CO2孵育16-48小時，倒置顯微鏡下觀察。
3. 每孔加入10 ul MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。
4. 離心（1000轉(zhuǎn)x10min），小心吸掉上清，每孔加入100 ul溶解液，置搖床上低速振蕩10 min，使結(jié)晶物充分溶解。490nm或550nm或570nm處測量各孔的吸光值。
5. 同時設(shè)置調(diào)零孔（培養(yǎng)基、MTT、溶解液），對照孔（細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、溶解液），每組設(shè)定3-5復(fù)孔。