RIPA裂解液（蛋白裂解液）

產(chǎn)品概述product description

保存溫度

2-8°C

注意事項(xiàng)

使用注意事項(xiàng):

口旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的波體

口實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)令;所有器真領(lǐng)的。做體能生管底，避免開蓋時(shí)液體酒落。

口蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影室過程 須保持樣品處于低溫。

0如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完，蛋白酶抑制的有物的”中安H。

0可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劉單日

一次全部加入提取液。

口下游實(shí)驗(yàn)如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測

提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程

保持低溫操作,縮短離心時(shí)間。

有效期

1企

檢測方法

WB、IP等

適用樣本

細(xì)胞、組

產(chǎn)品特點(diǎn)

。便用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等萌處理。

口提取過程簡單方便，將蛋白提取的時(shí)間縮短至30分鐘-1小時(shí)。

u含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

口紫外檢測蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

。象再起據(jù)取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和噴蛋白， 又可結(jié)合程

。重上的拉制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。 蛋白藏機(jī)制治人民樣中的蛋白防止沉淀。

preinin Leupeptin. PepstatinA. Bestatin. E-64, 每種抑制劉可性包業(yè)的蛋日酶抑制劑IAEBSF、

史兵的以科制 乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酚是白籍 業(yè)國口等法性。該混合

酰-氨基肽酶等。

半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨

產(chǎn)品應(yīng)用

WB. IP等

儀器準(zhǔn)備

0離心機(jī)

0振蕩器

0勻漿機(jī)/勻漿器

0渦旋混勻器

0移液器

0冰箱

0冰盒

試劑準(zhǔn)備

OPBS緩沖液(PH7.4, 實(shí)驗(yàn)室常用的10mM磷酸緩沖

PBS:約含8mM Na2HPO4. 2mMKHDPC

有酸緩沖鹽溶液(1x) ) (phosphate bffer slni/0lbel 。

0蛋白定量試劑盒

耗材準(zhǔn)備

0離心管

0吸頭

0 -次性手套

使用方法

.細(xì)胞裂解

1.烈紹波制發(fā).

每1ml冷的RIP/

BRPA裂解液中加入2 u蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

口樣品用于測定某些細(xì)胞內(nèi)蛋白酶、

磷酸酶活性等下游實(shí)驗(yàn)時(shí)，注意根據(jù)實(shí)際情況

，的 。10生日定收收為此步配制好的含 蛋白酶抑制劑的提取液。

3.用冷PBS法漆細(xì)胞4, 100xg條件下離心5-10分鐘,小心吸取培養(yǎng)基,盡可能吸干,收集細(xì)的

4胞兩次,每次洗滌后盡可能吸干上清。

[注

6個(gè)9胞中加入500山的的翻解液， 海與后，在4C條件下振15-20分鐘。

山，或

2-個(gè)75。 1mg或山細(xì)胞沉淀體積,加1000 ul RIPA裂解液。大約相當(dāng)于6孔柘的每兒

?？堤锉眒。裂解液和細(xì)胞應(yīng)充分接觸。 如果RIPA裂解液不足是細(xì)的的HI~150

。天地出文低轉(zhuǎn)速，提取液能輕微晃動即可。

5.在40C1

來件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時(shí)間

中間每隔幾分鐘用移液器吹打

; C 1000000條件下離心10分鐘。

6.快速將上清吸入另預(yù)令的干凈離心管， 用于下游實(shí)驗(yàn)。

B. 組織裂解

1. 烈解海，

+打.

i每1n冷的RIPA裂解液加入2 山蛋白酶抑制混合物，混勻后置冰上備用。

0以下出。,莊的 肥內(nèi)蛋日酶、 磷酸酶活性等下游實(shí)驗(yàn)時(shí)，注意根據(jù)實(shí)際情況

調(diào)整抑制劑混合物是否加入。

。m10 口定以液為此步配制好的含 蛋白酶抑制劑的提取液

3.將組織樣本相碎。 加入1m裂解液，用組織勻漿器與漿至無明顯肉眼可見固體。

[注) .

勻漿在4C振蕩15-25分鐘。

o使用振法

口使用振蕩疆/搖床的較低轉(zhuǎn)速，

提取液能輕微晃動即可。

4.在40

1200 可以不振蕩，稍微延長提取液的外理時(shí)間,中間每隔幾

日楊液器吹打混勻即可。

5.將上

12000xg條件下離心10分鐘。

5.將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管, 用于下游實(shí)驗(yàn)。

[注]

還蛋日提取物可分裝后于- 80°C冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

“建議用BCA法進(jìn)行蛋白定量。相關(guān)產(chǎn)品: BB-3401.

口蛋日樣品8C存放年沒有問題。 注意不要接蛋白酶水解掉,不要被細(xì)菌污染。

常見問題分析

0細(xì)胞裂解速度慢?

為了充分保證提取得到的蛋白的活性， 提取液采用獨(dú)特的保護(hù)蛋白的配方

裂解能力溫和，下游應(yīng)用范圍廣。 適當(dāng)延長裂

解的時(shí)間即可。

0蛋白濃度低?

處理部分組織樣本時(shí)可能沒有裂解完全,導(dǎo)致蛋白濃度低，

下處理， 沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混夕。

大要適當(dāng)延長試劑A的處理時(shí)間即呵。最好在持續(xù)振蕩的條件

口用什么方法定量蛋白?

建議用BCA法。 不適合用radford法,因?yàn)樵噭〢中含有于擾Brac

處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以Bradrord法定量。

Tord法的組份， 導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析

0提取時(shí)出現(xiàn)膠狀沉淀?

蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時(shí)會出現(xiàn)少量透明膠狀物, 屬正常現(xiàn)象。 該話

和基因組DNA結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接高心物力合有基

組DNA等的復(fù)合物。不檢測

付別系密的蛋白，則可以通過超聲處理, 300w/10種間隔10孫王題即印; 如果需要檢測和基因組結(jié)合

見的轉(zhuǎn)錄因子，例n如N-appaB. p53等時(shí)， 不必進(jìn)行超聲處理。

t隨石離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。檢測-些常

口提取的蛋白具有活性嗎?

象和活性。