DAPI染色液

產(chǎn)品概述product description

DAPI染色試劑用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色，染色

后可用熒光顯微鏡檢測或流式細(xì)胞儀檢測。DAPI (diamidino-2-phenylindole)能與雙鏈DNA小槽,特

別是AT堿基結(jié)合,也可插入少于3個(gè)連續(xù)AT堿基對的DNA序列中。當(dāng)它與雙鏈DNA結(jié)合時(shí),熒光強(qiáng)度增

強(qiáng)20倍,而與單鏈DNA結(jié)合則無熒光增強(qiáng)現(xiàn)象,因此是一種簡易、 快速和敏感地檢測DNA的方法。DAPI

的熒光強(qiáng)度較Hoechst低，但熒光穩(wěn)定性優(yōu)于Hoechst; 其特異性較溴化乙啶和碘化丙啶高。

保存溫度

2-8°C避光

注意事項(xiàng)

1.有效期為試劑盒末拆封前按要求條件保存的有效期。

2.試劑拆封后請盡快使用完!

有效期

- -年

檢測方法

流式細(xì)胞儀/熒光顯微鏡/激光共聚焦

適用樣本

動(dòng)物細(xì)胞

產(chǎn)品應(yīng)用

流式細(xì)胞儀/熒光顯微鏡/激光共聚焦

儀器準(zhǔn)備

1.流式細(xì)胞儀/熒光顯微鏡/激光共聚焦

2.離心機(jī)

3.移液器

4.冰箱

5.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液2.HBSS

耗材準(zhǔn)備

1.離心管

2.吸頭

3.-次性手套.

使用注意事項(xiàng)

1.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

2.細(xì)胞處理需要小心操作盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

3.染色后立即進(jìn)行分析。

4.染色時(shí)間根據(jù)不同樣本的實(shí)際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整。

使用方法

1.染艷工作液的配制:

根據(jù)樣品數(shù)用PBS將DAPI染色液10-100倍稀釋,配制成染色工作液。

2.細(xì)胞涂片的制備:

貼壁細(xì)胞，可將蓋玻片放于培養(yǎng)器皿中,讓培養(yǎng)細(xì)胞長于玻片上,然后用藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋后取出,用4%多聚甲醛固定

5min。也可其他方式培養(yǎng)后收集細(xì)胞制作涂片檢測。

對于懸浮細(xì)胞，用藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡后，500-1000g離心5分鐘收集細(xì)胞， PBS洗2次,收集調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1X105/ml,

涂片或用離心涂片,用4%多聚甲醛固定5min;

3.用PBS洗滌涂片兩次。

4.加適量染色工作液于涂片上,室溫避光染色5-20分鐘。

5.用熒光顯微鏡檢測結(jié)果。染料-DNA復(fù)合物的最大激發(fā)波長為360nm,最大發(fā)射波長為454nm。

結(jié)果分析:

于熒光顯微鏡下用360nm激發(fā)光觀察結(jié)果: DAPI染色呈藍(lán)白色熒光。

早期凋亡細(xì)胞呈現(xiàn)核濃縮,染色加深，或核染色質(zhì)呈新月形聚集于核膜一邊; 晚期凋亡細(xì)胞表現(xiàn)為核碎裂成大小不等的圓

形小體，并被細(xì)胞膜所包繞,即凋亡小體。