CCK-8細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品概述 product description

細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 是應(yīng)用新型的水溶性四唑鹽2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽快速高靈敏度檢測(cè)細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的比色檢測(cè)產(chǎn)品。 本四唑鹽在電子載體存在的情況下能夠被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原成橙黃色的水溶性的Formazan，生成的Formazan量與活細(xì)胞數(shù)量成正比。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)量呈線性關(guān)系。 CCK-8溶液可以直接加入到細(xì)胞樣品中，不需要預(yù)配各種成分，CCK-8溶液很穩(wěn)定，對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒性，可以長(zhǎng)時(shí)間孵育細(xì)胞。CCK-8法測(cè)定細(xì)胞增殖或毒性試驗(yàn)中活細(xì)胞數(shù)目的靈敏度高，無(wú)放射性，檢測(cè)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)的靈敏度比其它方法如MTT, XTT, MTS和WST-1高。

保存溫度

2-8℃避光

注意事項(xiàng)

長(zhǎng)期不用分裝后-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

有效期

一年

檢測(cè)方法

酶標(biāo)儀

適用樣本

動(dòng)物細(xì)胞

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.使用方便：僅使用單一試劑；
2.靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好，線性范圍更寬；
3.結(jié)果穩(wěn)定：試劑本身穩(wěn)定性高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定可靠；
4.無(wú)需放射性同位素和有機(jī)溶劑，對(duì)細(xì)胞毒性低；
5.適合于高通量藥物篩選。

產(chǎn)品應(yīng)用

酶標(biāo)儀

儀器準(zhǔn)備

1.帶有450nm濾光片的酶標(biāo)儀 2. CO2培養(yǎng)箱

試劑準(zhǔn)備

1.PBS 2.純水

耗材準(zhǔn)備

1.移液器及吸頭 2.96孔培養(yǎng)板

使用注意事項(xiàng)

1.本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。
2.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。
3.禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。
4.樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5.最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹底清除殘留清潔劑。
6.避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

使用方法

細(xì)胞活性、細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)
1、收集細(xì)胞，加細(xì)胞懸液100ul（約5000-10000個(gè)細(xì)胞）到96孔板（邊緣孔用無(wú)菌水或PBS填充）。每板設(shè)對(duì)照（加100?l培養(yǎng)基）。
2、置37℃，5% CO2孵育過(guò)夜，倒置顯微鏡下觀察。
3、每孔加入10 ul 待檢測(cè)藥物溶液， 37℃孵育。
4、每孔加入10 ul CCK-8溶液，37℃孵育1-4 小時(shí)。
5、測(cè)定450 nm各孔的吸光值，如無(wú)450nm濾光片，可以使用450-490nm的濾光片。
6、同時(shí)設(shè)置空白孔（培養(yǎng)基和CCK-8溶液，無(wú)細(xì)胞），對(duì)照孔（不加藥培養(yǎng)基和CCK-8溶液，有細(xì)胞），每組設(shè)定3-5復(fù)孔。


細(xì)胞活力計(jì)算：
將各測(cè)試孔的OD值減去調(diào)零孔OD值或?qū)φ湛譕D值。各重復(fù)孔的OD值取平均數(shù)。
細(xì)胞活力% =（（加藥細(xì)胞OD - 空白OD）/（對(duì)照細(xì)胞OD - 空白OD））×100
抑制率% = （（對(duì)照細(xì)胞OD - 加藥細(xì)胞OD）/（對(duì)照細(xì)胞OD - 空白OD））×100

常見(jiàn)問(wèn)題分析

1.如果OD值偏低，可以適當(dāng)增加細(xì)胞數(shù)量或延長(zhǎng)加入CCK-8后的培養(yǎng)時(shí)間。 2.如果細(xì)胞數(shù)據(jù)出現(xiàn)異常增加，或者數(shù)據(jù)結(jié)果的方向相反等問(wèn)題，可能是實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生了氣泡、鋪板不均勻等操作問(wèn)題，請(qǐng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。