細胞周期檢測試劑盒

產(chǎn)品概述 product description

?細胞周期檢測試劑盒是利用細胞內(nèi)DNA能夠和熒光染料結(jié)合的特性，細胞各個時期其DNA含量不同從而結(jié)合的熒光染料不同，流式細胞儀檢測的熒光強度也不一樣來檢測細胞周期。 細胞周期（cell cycle)是指細胞從前一次分裂結(jié)束起到下一次分裂結(jié)束為止的活動過程，通常由G0/G1期、S期、G2期和M期組成。G1期：細胞開始RNA和蛋白質(zhì)的合成，但DNA含量仍保持二倍體。S期：DNA開始合成，這時細胞核內(nèi)DNA的含量介于G1期和G2期之間。當(dāng)DNA復(fù)制結(jié)束成為4倍體時，細胞進入G2期。G2期的細胞繼續(xù)合成RNA及蛋白質(zhì)，直到進入M期。因此，單純從DNA含量無法區(qū)分G2期和M期。一旦有絲分裂發(fā)生，細胞分裂成兩個細胞，這兩個細胞或者進入下一個細胞周期，或者進入靜止期（G0期），而G0期從DNA含量上同樣無法與G1期區(qū)分。因此，整個復(fù)制周期可以描述為G0/G1、S、G2/M期。通過核酸染料PI標記DNA,并由流式細胞儀進行分析，可以得到細胞各個時期的分布狀態(tài)，計算出G0/G1%、S%、G2/M%，了解增殖能力，在腫瘤病理學(xué)研究中，通常以S期細胞比率作為判斷腫瘤增殖狀態(tài)的指標。 PI為插入性核酸熒光染料，能選擇性的嵌入核酸DNA和RNA雙鏈螺旋的堿基之間與之結(jié)合，其結(jié)合的量與DNA的含量成正比例關(guān)系，用流式細胞儀進行分析，就可以得到細胞周期各個階段的DNA分布狀態(tài)，從而計算出各個期的百分含量。PI染色后，假設(shè)G0/G1期細胞的熒光強度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為2，正在進行DNA復(fù)制的S期細胞的熒光強度為1-2之間。 貝博? BBcellProbe? 可以提供各種細胞檢測試劑盒。包括細胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、細胞代謝、氧化應(yīng)激、細胞膜流動性、膜通透性轉(zhuǎn)換孔、細胞耗氧率、細胞內(nèi)pH、細胞粘附、細胞自噬等數(shù)百種檢測試劑盒產(chǎn)品。 貝博? BBcellProbe? 可以為您提供各種顏色的BBcellProbe? M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等細胞膜、細胞質(zhì)、細胞核、溶酶體、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、骨架、微管等細胞、細胞亞結(jié)構(gòu)熒光染色試劑盒產(chǎn)品，以及鈣離子、鈉離子、氬離子等各種熒光染色試劑盒產(chǎn)品。 貝博? BBcellProbe? 可以提供動物、植物、微生物、酵母、水產(chǎn)、家禽、獸類、土壤等樣本的各種生化指標檢測的數(shù)百種試劑盒產(chǎn)品。

保存溫度

-20℃避光

注意事項

1.染料-20℃避光保存；
2.Rnase A溶液-20℃保存。

有效期

1年

檢測方法

流式細胞儀

適用樣本

1.懸浮細胞 2.貼壁細胞

產(chǎn)品特點

產(chǎn)品應(yīng)用

流式細胞儀

儀器準備

1.流式細胞儀
2.離心機
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒

試劑準備

1.PBS 緩沖液（pH7.4，實驗室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液（1X））
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）

耗材準備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項

1.細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
2.最好使用含EDTA的細胞消化液。
3.洗滌細胞離心轉(zhuǎn)速不可超過800×g。
4.乙醇固定時離心大概采用2000×g力5分鐘，離心力太小可能部分細胞難以沉淀。

使用方法

1. 收集樣本細胞，細胞數(shù)量在5-10X106個。

2. 用冷PBS洗滌細胞兩次。

3. 在15ml離心管中，用500 μl PBS重懸細胞。

4. 滴加2-5ml冷乙醇4℃固定過夜或-20℃固定1小時。

5. 取5X106細胞，在15ml錐形離心管中1000×g離心10分鐘，棄上清，收集細胞。
6. 用冷PBS洗滌細胞兩次。

7. 用500 μl冷PBS重懸細胞。

8. 加入Rnase A溶液20 μl， 37℃水浴30分鐘。
9. 用400目細胞篩網(wǎng)過濾。

10. 在1000×g離心10分鐘，棄上清，收集細胞。
11. 加入400 μl PI染液重懸細胞，輕輕混勻后4℃避光孵育30分鐘-1小時。
12. 流式檢測結(jié)果。激發(fā)波長為488nm。采用適當(dāng)分析軟件進行細胞DNA含量分析和光散射分析。

常見問題分析

1.染色后找不到細胞？
固定細胞可能難以離心沉淀；固定細胞可能成團；固定細胞膜容易損傷成碎片。操作過程中注意以上幾點。

2.可以不固定細胞嗎？
本試劑盒可以用于非固定細胞的周期檢測。