膜蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品概述product description

膜蛋白提取試劑盒是一-種快速高效的高產(chǎn)膜蛋白提取試劑盒。 本試劑盒提供全套試劑，適用于從動物細胞和動物組織提取總膜蛋白。提取過程簡單方便,可在1小時內(nèi)完成。提取的膜蛋白不僅純度高,保持天然活性,而且絕少交叉污染。本試劑盒 含有的獨特配方能夠有效溶解細胞膜組份，包括細胞質(zhì)膜、核膜和各種細胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解,為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒 提取的蛋白可用于Western Blotting. 蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、 轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA, 與金屬螯和層析等下游應用兼容。

保存溫度

2-8°C

注意事項

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8°C儲存。開蓋使用后-20°C儲存。

2.蛋白酶抑制劑在2-8°C低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37°C短時間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部

3.試劑拆封后請盡快使用完!

有效期

檢測方法

WB,IP等

適用樣本

動物細胞/組織

產(chǎn)品特點

1.使用方便,從細胞,組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。

2.將蛋白提取的時間縮短至1小時。

3.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

5.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種

抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。 該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨

酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

產(chǎn)品應用

WB,IP等

儀器準備

1.離心機

2.振蕩器

3.勻漿機/勻漿器

4.渦旋混勻器

5.移液器

6.冰箱

7.冰盒

試劑準備

1.PBS緩沖液

2.白定量試劑盒

耗材準備

1.離心管

2.吸頭

.-次性手套

使用注意事項

使用注意事項:

0旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

0蛋白酶抑制劑在2-8°C時是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復至室溫或37C短時間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開

0實驗過程中的所有試劑須預冷;所有器具須放20°C冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

0蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。

0如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

0可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

0下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋E 3酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程

保持低溫操作，縮短離心時間。

使用方法

細胞蛋白提取

1.提取液準備:

每500μl冷的蛋白提取液A中加入2μ蛋白酶抑制劑混合物,混勻后置冰上備用。

每500μ膜蛋白溶解液C中加入2μ蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2.取5-10x106個以上細胞,在4C, 500xg條件 下離心3-5分鐘,小心吸取培養(yǎng)基,盡可能吸干,收集細胞。

4.細胞樣品中加入200ul-400u冷的試劑A,充分混勻。

5.在2-8°C條件下振蕩20-30分鐘,至細胞充分裂解，細胞沉淀明顯減少。

6.在4°C, 12000xg條件下離心5分鐘。

7.將上清吸入另-干凈離心管,在37°C水浴5-10分鐘。

8.在37°C, 1000xg力離心5分鐘,此時溶液分為兩層，下層是膜蛋白約為30-50ul。

9. 小心移除上層液體,收集上層部分留作備用分析。

10.用150-200ul冰冷的試劑B充分溶解下層膜蛋白部分,混勻后冰浴2分鐘, 37°C水浴5-10分鐘, 37°C, 1000xg力離心

5分鐘，此時溶液分為兩層，下層是膜蛋白約為30-50ul.小心移除上層液體,保留下層。

11.按以上步驟再次抽提下層膜蛋白(此步驟可以選做，一般不需要做)。

12.用50-200ul冷的試劑C膜蛋白溶解液溶解下層膜蛋白部分,即得膜蛋白。

13.將上述蛋白提取物定量后分裝于- 80°C冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?/p>

組織蛋白提取

每500u冷的蛋白提取液A中加入2u蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

每500μ膜蛋白溶解液C中加入2μ蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2.取50mg-100mg適量組織樣本,用冷PBS洗干凈, 然后用手術剪刀盡可能剪碎，加400ul冷的試劑 A,用組織勻漿機/

器勻漿至無明顯肉眼可見固體。

3.將組織勻漿吸入-預冷的干凈離心管中, 在4'C條件下振蕩20-30分鐘。

4.按照細胞蛋白的提取方法的第5步驟往下操作即可。

常見問題分析

1.蛋白濃度低?

膜蛋白豐度比較低,在條件允許的情況下，需要盡可能加大細胞的上樣量以提高膜蛋白濃度。

處理部分組織樣本時可能沒有裂解完全，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件

下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.用什么方法定量蛋白?

建議用BCA法。