Ca2+鈣離子染色試劑盒

產(chǎn)品概述product description?

細(xì)胞內(nèi)鈣離子染色試劑盒是利用F系列Ca2+鈣離子熒光探針進(jìn)行鈣離子特異性染色的試劑盒。本試劑盒中的F03細(xì)胞內(nèi)鈣離子染色探針為綠色熒光標(biāo)記

的鈣離子探針，具有505 / 525nm的最大激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)F03具有極高的細(xì)胞滲透性，經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單孵育即可實(shí)現(xiàn)細(xì)胞加載。穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成不易透過(guò)細(xì)胞膜的F03新產(chǎn)物，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。F03游離配體幾乎是非熒光性的，其英光不會(huì)隨鈣離子濃度升高而增

強(qiáng)。但是,當(dāng)它與細(xì)胞內(nèi)鈣離子結(jié)合后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光,熒光會(huì)增加60至100倍, 被激發(fā)后可以發(fā)出綠色的熒光，具有很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。最大激發(fā)波長(zhǎng)為505nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為525nm。實(shí)際檢測(cè)時(shí)推薦使用的激發(fā)波長(zhǎng)為488nm左右，發(fā)射波長(zhǎng)為515 ~ 530nm。可以使用熒光顯微鏡、酶標(biāo)

儀、激光共聚焦顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。F03熒光探針采用可見(jiàn)光激發(fā),與傳統(tǒng)的紫外光激發(fā)的熒光探針相比,儀器的適用范圍更廣泛,具有更強(qiáng)的探針吸收性能，使得更低濃度的探針即可成功檢測(cè)Ca2: +變化，從而降低了對(duì)活細(xì)胞的光毒性,檢測(cè)敏感度更高。

保存溫度

-20°C避光

注意事項(xiàng)

1.探針染料短期2周內(nèi)可以2-8°C保存。探針長(zhǎng)期不用可以-20°C保存。避免反復(fù)凍融。

2.探針染色液A為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)為凝固狀態(tài),極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解,變成液體狀

態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋

有效期

6個(gè)月

檢測(cè)方法

1.流式細(xì)胞儀

2.熒光顯微鏡

3.激光共聚焦

適用樣本

1.懸浮細(xì)胞

產(chǎn)品應(yīng)用

流式細(xì)胞儀/熒光顯微鏡/激光共聚焦

儀器準(zhǔn)備

1.激光共聚焦/熒光顯微鏡//光度計(jì)/流式細(xì)胞儀

2.離心機(jī)

3.移液器

4.冰箱

5.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液2.HBSS

耗材準(zhǔn)備

1.離心管

2.吸頭

3.-次性手套

使用注意事項(xiàng)

1.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

2.探針染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時(shí)在室溫時(shí)為凝固狀態(tài)，極易粘附在管壁、吸頭壁。 注意需要加熱溶解,吸頭

也需要放在培養(yǎng)箱預(yù)熱，否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。

使用方法

1. 染色工作液的配制:

根據(jù)樣本數(shù)量,用37°C培養(yǎng)箱預(yù)熱的HBSS將BcellProbe⑧ F03熒光染料200-1000倍稀釋,配制成染色工作液。

2. 細(xì)胞染色

懸浮細(xì)胞染色

1)用PBS洗滌細(xì)胞2次。

2)加入適量體積的染色工作液重懸細(xì)胞,使其密度大約為1 x106/mL。

3) 在37 °C孵育細(xì)胞20分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同?？梢杂?0分鐘作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均

-的標(biāo)記結(jié)果。

4)加入5倍體積的含有1%胎牛血清的HBSS,再繼續(xù)孵育40分鐘。

5)孵育結(jié)束, 500 g離心5分鐘。

6)棄上清液，再次緩慢加入37°C預(yù)熱的HBSS重懸細(xì)胞。

7)重復(fù)(5)，(6) 步驟兩次。

8)加入HBSS重懸細(xì)胞，在37°C 下再繼續(xù)孵育20分鐘。

9)然后用該細(xì)胞進(jìn)行熒光鈣離子檢測(cè)。

貼壁細(xì)胞染色

1)用PBS洗滌細(xì)胞2次。

2)細(xì)胞培養(yǎng)板中或細(xì)胞爬片上加入適量體積的染色工作液。

3) 37 °C 孵育細(xì)胞20分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。可以用20分鐘作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一

的標(biāo)記結(jié)果。

4) 吸干染色工作液,用HBSS洗培養(yǎng)板或蓋玻片2~ 3次,每次用預(yù)熱的HBSS覆蓋所有細(xì)胞，然后吸干培養(yǎng)基。

5) 加入HBSS,在37°C下再繼續(xù)孵育20分鐘。

6)然后用該細(xì)胞進(jìn)行熒光鈣離子檢測(cè)。

3.用熒光顯微鏡 或流式細(xì)胞儀檢測(cè)

激發(fā)波長(zhǎng)為488nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為525nm。