核蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品概述product description

核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種原代或傳代動物細(xì)胞和各種動物實體組織，如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、 心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織等動物組織中提取核蛋白和胞漿蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內(nèi)完成。制備的核蛋白和胞漿蛋白不僅純

度高,保持天然活性,而且絕少交叉污染。本試劑盒 含有的獨特配方能夠有效溶解細(xì)胞核膜組份。本試齊盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、免疫共沉淀、酶活性測定

等蛋白研究。如果下游應(yīng)用是金屬整和層析等不能含EDTA試劑的實驗,可以聯(lián)系貝博更換不含EDTA的蛋白酶抑制劑混合物。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。 本試劑盒提取的蛋白含高濃度鹽,不可直接用于2D電泳，需要透析、 脫鹽后在用于2D電泳。 如下游實驗需要直接用于2D電泳，請

使用其他貨號的試劑盒。

保存溫度

2-8°C

注意事項

1.蛋白酶抑制劑末開蓋使用前也可以2-8°C儲存。開蓋使用后20°C儲存。

2.蛋白酶抑制劑在2-8°C低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37°C短時間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部

3.試劑拆封后請盡快使用完!

有效期

檢測方法

WB,IP等

適用樣本

動物細(xì)胞/組織

產(chǎn)品特點

1.使用方便,從細(xì)胞,組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

2.提取過程簡單方便，將蛋白提取的時間縮短至30分鐘- 1小時。

3.含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

5.總蛋白提取液含多種有效成分,可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白,又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。

6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、

Aprotinin、Leupeptin、 Pepstatin A、Bestatin、 E-64, 每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。 該混合

物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨

酰-氨基肽酶等。

產(chǎn)品應(yīng)用

WB,IP等

儀器準(zhǔn)備

1.離心機(jī)

2.振蕩器

3.勻漿機(jī)/勻漿器

4.渦旋混勻器

5.移液器

6.冰箱

7.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液

2.蛋白定量試劑盒

耗材準(zhǔn)備

1.離心管

2.吸頭

3.-次性手套

使用注意事項

使用注意事項: .

0旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

0蛋白酶抑制劑在2-8°C時是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37°C短時間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開

0實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷;所有器具須放-20°C冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

0蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

0如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以-次全部加入提取液。

0可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

0下游實驗如果是進(jìn)行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程

保持低溫操作，縮短離心時間。

使用方法

細(xì)胞蛋白提取

1.提取液制備:

每500 u冷的蛋白提取液A加入1 u蛋白酶抑制劑混合物和1 μI磷酸酶抑制劑。

每200 ul冷的蛋白提取液B中加入1 μ蛋白酶抑制劑混合物和1 μl磷酸酶抑制劑,混勻后置冰上備用。

2.取5-10x106個細(xì)胞，在4°C , 500xg力條件 下離心5分鐘,小心吸取培養(yǎng)基,盡可能吸干,收集細(xì)胞。

3.用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次,每次洗滌后盡可能吸干上清。

4.每20 μul體積細(xì)胞沉淀(約20 mg, 2x106個細(xì)胞) 中加入200-300 u冷的提取液A,高速渦旋振蕩混勻或吹打混勻,

置2-8°C條件振蕩10-30分鐘。

5.然后在4°C, 2000xg條件 下離心5分鐘。

6.將上清吸入另-預(yù)冷的干凈離心管, 即可得到胞漿蛋白,請置于冰上或-80°C冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

7.在沉淀中加入80-200 u冷的提取液B,高速渦旋振蕩15秒。

8.置2-8°C條件振蕩30-40分鐘。

9. 在4°C, 12000xg條件下離心10分鐘。

10.將上清吸入另-預(yù)冷的干凈離心管, 即可得到核蛋白。

11. 將.上述蛋白提取物定量后分裝于-80°C冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?/p>