細(xì)胞自噬檢測試劑盒（綠色熒光）

產(chǎn)品概述product description

自噬(autophagy)是細(xì)胞受到刺激后吞噬自身的細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞器,最終將吞食物在溶酶體內(nèi)降解的過程，自噬體(autophagosome)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結(jié)構(gòu)，內(nèi)含細(xì)胞質(zhì)、長壽蛋白質(zhì)和異常蛋白聚集物，損傷或多余細(xì)胞器如線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和微體、病毒和細(xì)菌等。自噬是溶酶體介導(dǎo)的胞內(nèi)降解途

徑，是真核細(xì)胞在惡劣環(huán)境(比如營養(yǎng)缺乏)威脅時(shí)引發(fā)的降解和細(xì)胞內(nèi)容物再循環(huán)的過程。這一途徑在對(duì)各種應(yīng)激條件進(jìn)行應(yīng)答從而在促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)環(huán)境平衡、能量平衡和細(xì)胞存活上具有重要的作用，更多的證據(jù)表明自噬功能與多種疾病密切相關(guān),包括癌癥、神經(jīng)退行性疾病、糖尿病、自身免疫性疾病和心血管疾

病。細(xì)胞自噬檢測試劑盒是采用MDC染色法染色細(xì)胞內(nèi)自噬體的檢測試劑盒,該產(chǎn)品可代替?zhèn)鹘y(tǒng)LC3-GFP法，通過熒光示蹤物來選擇性檢測自噬通路中的各種囊泡包括自噬前體、自噬體和自溶酶體，用于流式細(xì)胞儀,無需轉(zhuǎn)染，就能在熒光顯微鏡下跟蹤活細(xì)胞的自噬過程進(jìn)行定量分析,或用流式細(xì)胞儀進(jìn)行高通量篩選，甚至能標(biāo)記原代細(xì)胞。并且該產(chǎn)品可以進(jìn)行自噬通路的動(dòng)力學(xué)分析,為研究者展現(xiàn)自噬體形成和消除之間的動(dòng)態(tài)平衡。細(xì)胞自噬檢測試劑盒中的BBcellProbe@ MDC自噬體染色探針為綠色熒光標(biāo)記的自噬體探針，具有335nm / 518nm的最大激發(fā)/發(fā)射波長?？梢蕴峁┘?xì)胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、細(xì)胞代謝、氧化應(yīng)激、細(xì)胞膜流動(dòng)性、膜通透性轉(zhuǎn)換孔、細(xì)胞耗氧率、細(xì)胞內(nèi)pH、 細(xì)胞粘附、細(xì)胞自噬等數(shù)百種檢測試劑盒產(chǎn)品。

保存溫度

2-8°C避光

注意事項(xiàng)

2.染色液A為DMSO溶液,冬季氣溫較低時(shí)為凝固狀態(tài),極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態(tài)后

離心至管底部再開蓋。

有效期

檢測方法

激光共聚焦/熒光顯微鏡/流式細(xì)胞儀

適用樣本

動(dòng)物細(xì)胞

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.無需轉(zhuǎn)染,可在活細(xì)胞內(nèi)定量檢測細(xì)胞自噬情況，可在活細(xì)胞內(nèi)定量檢測自噬小泡和監(jiān)控活細(xì)胞自噬流(自噬體的合

成自噬底物到溶酶體的運(yùn)輸、自噬底物在溶酶體的降解過程);

2.適用于流式細(xì)胞檢測和顯微鏡分析;

3.可用于高通量篩選自噬的激活劑和抑制劑;

4.可選擇性地對(duì)前自噬體、自噬體和自噬性溶酶體進(jìn)行染色,而對(duì)溶酶體染色較少。

產(chǎn)品應(yīng)用

激光共聚焦/熒光顯微鏡/流式細(xì)胞儀

儀器準(zhǔn)備

1.激光共聚焦/熒光顯微鏡/流式細(xì)胞儀

2.離心機(jī)

3.移液器

4.冰箱

5.冰盒

試劑準(zhǔn)備

1.PBS緩沖液2.HBSS

耗材準(zhǔn)備

1.離心管

2.吸頭

3.-次性手套

使用注意事項(xiàng)

1.標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類而異，根據(jù)不同樣本的實(shí)際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整 ，在每次實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)先根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求、

胞類型、細(xì)胞的膜通透性等進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳條件。以下方法僅供參考。

2.染色后立即進(jìn)行分析。

3.本試劑采用紫外激發(fā),不能用藍(lán)光激發(fā)。

使用方法

1.染色工作液配制:

根據(jù)樣本數(shù)量，用檢測緩沖液將MDC熒光染料10倍稀釋,再用相應(yīng)的培養(yǎng)基或者HBSS緩沖液40-200倍稀釋,配制成染

色工作液。

2.細(xì)胞染

2.1對(duì)于貼壁細(xì)胞

1)將細(xì)胞置于培養(yǎng)皿中的蓋玻片上,加入合適培養(yǎng)基,使其爬片生長。

2)待細(xì)胞生長到合適豐度，吸除培養(yǎng)液, 加入適量37°C預(yù)熱的含MDC探針工作液。于生長狀態(tài)下孵育15分鐘-1小時(shí)

(具體孵育時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類型而定)。

3)利用新鮮培養(yǎng)基或PBS替換上述染色液并在熒光顯微鏡(含合適濾片)下觀察。

2.2對(duì)于懸浮細(xì)胞

1)離心,吸除上清。

2)利用37°C 預(yù)熱的探針工作液重懸細(xì)胞,于生長狀態(tài)下孵育15分鐘~ 1小時(shí)(具體時(shí)間需根據(jù)細(xì)胞類型而定)。

3)離心，吸除染色液,加入新鮮培養(yǎng)液或PBS重懸細(xì)胞。

4)置于熒光鏡下觀察或流式檢測。

3.觀察結(jié)果:

在熒光顯微鏡(含合適濾片) /酶標(biāo)儀/流式細(xì)胞儀下觀察細(xì)胞。

最大激發(fā)/發(fā)射波長為335/518 nm。

常見問題分析

1.為什么488nm激發(fā)沒有綠色熒光?

不同于大多數(shù)常見的488nm激發(fā)的綠色熒光染料，本自噬體綠色熒光探針應(yīng)采用紫外光激發(fā)。

不能采用FITC的檢測條件激發(fā)本自噬熒光探針。