Annexin V-Alexa Fluor488 / 7-AAD 細胞凋亡檢測試劑盒

產(chǎn)品概述 product description

細胞凋亡是細胞的基本特征之一，它在機體的胚胎發(fā)育、組織修復、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和一些疾病發(fā)生過程等方面起著十分重要的作用。 在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。在體內(nèi)，巨噬細胞可以識別翻轉(zhuǎn)到細胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細胞清除，因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應，而在細胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應。 AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與細胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的PS高親和力特異性結合。PS 外翻發(fā)生在細胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相關蛋白出現(xiàn)之前，這使得Annexin V 與PS 的結合成為凋亡早期的一種重要檢測標志事件。

保存溫度

2-8℃避光

注意事項

1.開蓋前請離心。
2.開蓋后組份按要求條件保存。
3.拆封后請盡快使用完！

有效期

1年

檢測方法

1.流式細胞儀
2.激光共聚焦
3.熒光顯微鏡
4.熒光酶標儀

適用樣本

1.懸浮細胞
2.貼壁細胞

產(chǎn)品特點

1.方便：可用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測；
2.快速：1小時內(nèi)即可完成實驗；
3.準確：能準確區(qū)分活細胞、凋亡細胞和壞死細胞，并計數(shù)各群細胞的比例。

產(chǎn)品應用

1.流式細胞儀
2.激光共聚焦
3.熒光顯微鏡
4.熒光酶標儀

儀器準備

1.流式細胞儀或熒光顯微鏡或激光共聚焦
2.離心機
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒

試劑準備

1.PBS 緩沖液（pH7.4，實驗室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液（1X））
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）

耗材準備

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
4.鋁箔

使用注意事項

1.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體損失導致試劑量不夠用。
2.細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。離心力在不損失細胞的前提下盡可能小，重懸細胞是動作要輕柔，避免多次反復的激烈吹打。不用渦旋振蕩器。
3.Annexin V-FITC（等）和Propidium iodide（等）是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光，盡量減少它們暴露在光下的時間。有必要時可以使用帶蓋子的冰盒或鋁箔紙避光。標記后將細胞保持在避光環(huán)境中。移液過程中短暫暴露在光線下（<30秒）是可以接受的。
4.由于細胞凋亡是一個快速和動態(tài)的過程，因此最好在染色后立即進行分析。
5.使用Annexin V-FITC（等） 試劑盒檢測凋亡需要針對活細胞。不要固定細胞，固定操作會對結果產(chǎn)生干擾。

常見問題分析

實驗過程中Annexin V染不上色或陽性率偏低?？赡艿脑蛉缦拢?br>1. 用于檢測的流式細胞儀/顯微鏡設置不當。調(diào)整使用正確的儀器設置。
2. 確定實驗中的誘導劑是否能產(chǎn)生凋亡?？赏ㄟ^設定確切凋亡誘導效果的陽性藥物對照來排除這一情況。
3. 細胞未啟動凋亡。重新確定誘導后凋亡啟動的時間點（時程實驗）。
4. 細胞數(shù)量偏少。增加細胞數(shù)量。
5. 貼壁細胞消化不當。Annexin V 跟PS 的結合需要Ca2+離子，結合液中含有Ca2+，EDTA 的消化會影響染色，建議使用無EDTA 的胰酶，或者消化后用PBS洗滌干凈。

實驗過程中陽性率偏高?？赡艿脑蛉缦拢?br>1. 用于檢測的流式細胞儀/顯微鏡設置不當。調(diào)整使用正確的儀器設置。
2. 細胞本身活力太差。實驗中發(fā)現(xiàn)未經(jīng)誘導凋亡的對照細胞經(jīng)染色后AnnexinV+/PI+雙陽性的細胞比例過高，造成這種結果的原因可能是細胞本身活力太差。建議用臺盼藍染色計算細胞的活力，臺盼藍拒染的細胞應大于95%。若活力偏低低，建議重新復蘇細胞，通常剛復蘇的細胞至少要傳代3 次以后才能進行實驗。